(1)取材固定:新鲜组织确定取材部位,尽量减小牵拉、挫伤与挤压等机械损伤,1-3min内取样,组织块面积不超过3mm2,用PBS轻轻漂洗将样本表面的血污,毛发等去掉,保护好需要扫描的面并做好标记(如在对面进行剪角处理)。迅速投入电镜固定液室温固定2h,再转移至4°保存。
(2)贴壁细胞:贴壁于盖玻片的细胞培养处理完成后弃培养基,用PBS轻轻漂洗后,弃PBS加电镜固定液室温固定2h,再转移至4°保存。注意保护好扫描面避免剧烈震荡细胞脱落。
(3)后固定:固定好的样品经0.1M磷酸缓冲液PB(PH7.4)漂洗3次,每次15min。0.1M磷酸缓冲液PB(PH7.4)配制1%锇酸室温避光固定1-2h。0.1M磷酸缓冲液PB(PH7.4)漂洗3次,每次15min。
(4)脱水:组织依次入30%-50%-70%-80%-90%-95%-100%-100%酒精每次15min,乙酸异戊酯15min。
(5)干燥:将样本放入临界点干燥仪内进行干燥。(干燥的样品及无机材料不需要以上步骤)
(6)样本导电处理:将样本紧贴于导电碳膜双面胶上放入离子溅射仪样品台上进行喷金30s左右。
(7)扫描电子显微镜下观察采图。
二、扫描电镜SEM检测服务样本准备方法及要求:
1、动植物组织样本:
①1-3min内取样,组织块不超过3mm2,用PBS轻轻漂洗将样本表面的血污,毛发等去掉,将需要扫描的面做好标记(如在对面进行剪角处理)。
②取材时一定注意避免镊子挤压等机械损伤,刀片要锋利避免挫伤组织。尤其是注意保护扫描面。
③组织取下后立即投入电镜固定液内室温固定2h,再转移至4℃保存,4℃冰袋运输,在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。
④植物样本放入固定液后需抽气沉底。
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